摘 要：本发明提供了一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，属于大麻检测技术领域。本发明首先将工业大麻样品研磨成粉末后过筛得到样品粉末，然后将样品粉末中加入提取溶液进行两次振荡提取，将所得提取液经滤膜过滤后通入装填有丙烯酸吸附树脂的层析柱中，进行富集，接着利用洗脱剂对富集后层析柱进行洗脱，得到洗脱液，将洗脱液进行浓缩，得到样品浓缩液，利用高效液相色谱技术进行检测，用标准工作曲线对样品进行定量。本发明提供的检测方法具有方法简单、操作方便、精确度高，可以有效排除干扰成分，高效快速检测工业大麻中大麻二酚的特点。
权利要求书
1.一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）称取工业大麻样品，用研磨成粉末后过40?100目筛，得到样品粉末，备用；
（2）将步骤（1）所述样品粉末置于容器中，接着向容器中加入甲醇和正己烷的混合溶液，振荡提取后，离心收集上清液，向样品残渣中加入甲醇和正己烷的混合溶液，重复上述提取步骤，将两次提取后所得上清液合并，得到样品提取液；
（3）将步骤（2）所述样品提取液经滤膜过滤后，将液体部分通入层析柱中，进行富集，接着利用洗脱剂对富集后层析柱进行等度洗脱，分段收集，得到洗脱液，将洗脱液进行浓缩，得到样品浓缩液；
（4）取大麻二酚的标准对照品配制不同浓度梯度的对照品溶液，采用高效液相色谱仪对样品浓缩液以及对照品溶液进行检测，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。
2.根据权利要求1所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，步骤（2）所述样品粉末与混合溶液的质量体积比为（2?5）g：(30?50)ml。
3.根据权利要求1所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，步骤（2）所述混合溶液中甲醇和正己烷的体积比为60?80:40?20。
4.根据权利要求1所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，步骤（2）所述振荡提取的时间为2?3h。
5.根据权利要求1所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，步骤（3）所述层析柱中填料为吸附树脂。
6.根据权利要求5所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，所述吸附树脂为丙烯酸吸附树脂。
7.根据权利要求1所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，步骤（3）所述样品提取液通入层析柱的速度为2?3ml/min。
8.根据权利要求1所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，步骤（3）所述洗脱剂为质量浓度3%的甲醇水溶液。
9.根据权利要求1所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，步骤（3）所述浓缩的方式为减压浓缩，所述浓缩指的是浓缩至原体积的1:10?15。
10.根据权利要求1所述利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，其特征在于，步骤（4）所述高效液相色谱条件的设置：流动相：体积比为80:20的甲醇和浓度为0.02mol/L乙酸铵溶液的混合液，流量为0.3mL/min；色谱柱：C18，150mm×2.1mm，3.5μm；检测器：紫外检测器；进样体积：30μl；色谱柱温度：30?45℃。
技术领域
本发明涉及大麻检测技术领域，尤其涉及一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法。
背景技术
大麻(CannabissativaL.)又名火麻、胡麻、线麻等，为桑科大麻属一年生的草本植物，多为雌雄异株。原产地为亚洲中部，因其生命力旺盛，且能迅速适应生长环境，现已在全球范围内广泛种植和栽培。大麻中主要含植物性大麻素类，植物性大麻素主要含大麻酚、大麻二酚、四氢大麻酚、大麻环酚萜等活性成分，其中以大麻二酚、四氢大麻酚的含量最高，且四氢大麻酚具有致幻作用与成瘾性。
在大麻中含大麻二酚最高的是工业大麻。工业大麻是指花叶干物质中总四氢大麻酚含量低于0.3%的大麻品种。我国的工业大麻主要分布在云南、贵州、黑龙江、河北、吉林等省。国内的工业大麻主要作为纤维原料，以黑龙江的麻纤维质量最好。目前国内只有云南、黑龙江两省颁布了种植、加工工业大麻合法性的地方法规。工业大麻中的大麻二酚被广泛应用于医药及化妆品领域。研究表明大麻二酚具有抗氧化活性、镇静、抗抑郁、抗炎活性、舒张血管等作用，且大麻二酚无致幻及上瘾的作用，是临床治疗乳腺癌、癫痫的新型药物，在化妆品领域也受到了广大消费者的青睐，如将大麻二酚加入雪花膏中制备成的抗炎祛斑雪花膏可用于女性祛斑，有巨大的市场开发前景。但是在工业大麻的种植和加工过程中，大麻二酚不断累积代谢，而且研究表明，在酸性条件下，大麻二酚可转化成具有成瘾性的物质，这增加了大麻在工业应用中的安全隐患。因此开展大麻二酚的检测方法研究对大麻原料及其制品的品质评价和安全控制具有重要意义。
目前关于工业大麻制品中大麻二酚含量的检测方法主要包括气相色谱法、气相色谱?质谱法、液相色谱法、核磁共振波谱法等，其中气相色谱法能够对部分大麻原料和制品中的大麻成分进行分析，但是检测时需要对样品进行衍生化处理，操作繁琐，耗时长，且对热不稳定的大麻素分析具有一定的局限性。液相色谱法可广泛应用于含量较高的大麻产品成分分析，但灵敏度较低、选择性差、受基质影响较大。气相色谱?质谱法能够有效对多种大麻制品进行定量分析，灵敏度高，检出限更低，但是通常需要衍生试剂进行衍生反应，会对热不稳定的大麻素分析产生影响。核磁共振光谱仪虽然在大麻素定性上更为准确，但是定量分析不如质谱技术方便快捷，此外仪器造价高等弊端限制了它的广泛应用。另外，大麻中含有的大麻二酚(CBD)、四氢大麻酚(THC)、大麻色烯(CBC)互为同分异构体，在检测过程中这三种大麻素极易出现保留时间一致的情况，且三者具有相同离子碎片，干扰大麻二酚的检测准确度。基于此，提供一种灵敏度高、选择性好、高效快速检测工业大麻中大麻二酚的检测方法是大麻检测技术领域中亟待解决的技术问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，包括以下步骤：
（1）称取工业大麻样品，用研磨机研磨成粉末后过40?100目筛，得到样品粉末，备用；
（2）将步骤（1）所述样品粉末置于容器中，接着向容器中加入甲醇和正己烷的混合溶液，振荡提取后，离心收集上清液，向样品残渣中加入甲醇和正己烷的混合溶液，重复上述提取步骤，将两次提取后所得上清液合并，得到样品提取液；
（3）将步骤（2）所述样品提取液经滤膜过滤后，将液体部分通入层析柱中，进行富集，接着利用洗脱剂对富集后层析柱进行等度洗脱，分段收集，得到洗脱液，将洗脱液进行浓缩，得到样品浓缩液；
（4）取大麻二酚的标准对照品配制不同浓度梯度的对照品溶液，采用高效液相色谱仪对样品浓缩液以及对照品溶液进行检测，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。
优选地，步骤（2）所述样品粉末与混合溶液的质量体积比为（2?5）g：(30?50)ml。
优选地，步骤（2）所述混合溶液中甲醇和正己烷的体积比为60?80:40?20。
优选地，步骤（2）所述振荡提取的时间为2?3h。
优选地，步骤（3）所述层析柱中填料为吸附树脂，步骤（3）所述滤膜为0.22μm的微孔有机滤膜。
优选地，步骤（3）所述样品提取液通入层析柱的速度为2?3ml/min。
优选地，步骤（3）所述浓缩的方式为减压浓缩。
优选地，步骤（3）所述浓缩指的是浓缩至原体积的1:10?15。
优选地，步骤（3）所述洗脱剂为质量浓度3%的甲醇水溶液。
优选地，步骤（4）所述高效液相色谱条件的设置：流动相：甲醇和浓度为0.02mol/L乙酸铵溶液的混合液，所述混合液中甲醇和乙酸铵溶液的体积比为80:20，流量为0.3mL/min；色谱柱：C18，150mm×2.1mm，3.5μm；检测器：紫外检测器；进样体积：30μl；色谱柱温度：30?45℃；对样品浓缩液和对照品溶液进行测定。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明将层析法和高效液相色谱法联用建立了一种高效快速检测工业大麻中大麻二酚的方法。该方法能够有效分离大麻二酚、四氢大麻酚和大麻色烯，消除相互间干扰，从而准确识别出是否含有大麻二酚。本发明具有方法简单、操作方便、精确度高，可以有效排除干扰成分，高效快速检测工业大麻中大麻二酚的特点。
具体实施方式
本发明提供了一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，包括以下步骤：
（1）称取工业大麻样品，用研磨机研磨成粉末后过40?100目筛，得到样品粉末，备用；
（2）将步骤（1）所述样品粉末置于容器中，接着向容器中加入甲醇和正己烷的混合溶液，振荡提取后，离心收集上清液，向样品残渣中加入甲醇和正己烷的混合溶液，重复上述提取步骤，将两次提取后所得上清液合并，得到样品提取液；
（3）将步骤（2）所述样品提取液经滤膜过滤后，将液体部分通入层析柱中，进行富集，接着利用洗脱剂对富集后层析柱进行等度洗脱，分段收集，得到洗脱液，将洗脱液进行浓缩，得到样品浓缩液；
（4）取大麻二酚的标准对照品配制不同浓度梯度的对照品溶液，采用高效液相色谱仪对样品浓缩液以及对照品溶液进行检测，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。
在本发明中，步骤（2）所述样品粉末与混合溶液的质量体积比为（2?5）g：(30?50)ml，进一步优选为3g：40ml。
在本发明中，步骤（2）所述混合溶液中甲醇和正己烷的体积比为60?80:40?20，进一步优选为70:30。
在本发明中，步骤（2）所述振荡提取的时间为2?3h，进一步优选为2.5h。
在本发明中，步骤（3）所述层析柱中填料为丙烯酸吸附树脂，步骤（3）所述滤膜为0.22μm的微孔有机滤膜，进一步优选的，所述微孔有机滤膜为聚四氟乙烯滤膜。
在本发明中，所述丙烯酸吸附树脂的制备方法为：将大孔丙烯酸型树脂D152装入烧杯中，依次用去离子水、1mol/LHCl、去离子水、1mol/LNaOH洗涤，用去离子水洗至流出液为中性，抽滤去除去离子水，接着用过量饱和的三氯化钴溶液流经预处理后的树脂，而后用蒸馏水洗至流出液无钴离子，然后置于烘箱中65摄氏度下真空干燥，制得丙烯酸吸附树脂。
在本发明中，所述丙烯酸吸附树脂的粒径在0.65?0.85mm范围内。
在本发明中，步骤（3）所述样品提取液通入层析柱的速度为2?3ml/min，进一步优选为2.5ml/min。
在本发明中，步骤（3）所述浓缩的方式为减压浓缩。
在本发明中，步骤（3）所述浓缩指的是浓缩至原体积的1:10?15，进一步优选为1:12。
优选地，步骤（3）所述洗脱剂为质量浓度3%的甲醇水溶液。
在本发明中，步骤（4）所述高效液相色谱条件的设置：流动相：甲醇和浓度为0.02mol/L乙酸铵溶液的混合液，所述混合液中甲醇和乙酸铵溶液的体积比为80:20，流量为0.3mL/min；色谱柱：C18，150mm×2.1mm，3.5μm（美国Waters公司）；检测器：紫外检测器；进样体积：30μl；色谱柱温度：30?45℃；对样品浓缩液和对照品溶液进行测定。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施例，都属于本发明所保护的范围。
下述实施例中所述试验方法或测试方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述原料和助剂，如无特殊说明，均从常规商业途径获得，或以常规方法制备。
实施例1
一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，具体步骤如下：
（1）先称取工业大麻样品，用研磨机研磨成粉末后过40目筛，得到样品粉末，备用；
（2）将步骤（1）所述样品粉末置于提取容器中，接着向提取容器中加入甲醇和正己烷的混合溶液，所述混合溶液中甲醇和正己烷的体积比为70:30，所述样品粉末与混合溶液的质量体积比为3g：40ml，振荡提取2.5h后，离心收集上清液，向样品残渣中加入甲醇和正己烷的混合溶液，重复上述提取步骤，将两次提取后所得上清液合并，得到样品提取液；
（3）将步骤（2）所述样品提取液经0.22μm的聚四氟乙烯滤膜过滤后，将液体部分通入装填有丙烯酸吸附树脂的层析柱中，进行富集，所述样品提取液通入层析柱的速度为2.5ml/min，接着利用质量浓度3%的甲醇水溶液作为洗脱剂对富集后层析柱进行等度洗脱，流速控制在2.0BV/h，分段收集，将富含大麻二酚的部分合并，得到洗脱液，将洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原体积的1:12，得到样品浓缩液；
所述丙烯酸吸附树脂的制备方法为：将大孔丙烯酸型树脂D152装入烧杯中，依次用去离子水、1mol/LHCl、去离子水、1mol/LNaOH洗涤，用去离子水洗至流出液为中性，抽滤去除去离子水，接着用过量饱和的三氯化钴溶液流经预处理后的树脂，而后用蒸馏水洗至流出液无钴离子，然后置于烘箱中65摄氏度下真空干燥，制得丙烯酸吸附树脂，所述丙烯酸吸附树脂的粒径在0.65?0.85mm范围内；
（4）取大麻二酚的标准对照品配制不同浓度梯度的对照品溶液，采用高效液相色谱仪对样品浓缩液以及对照品溶液进行检测，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量；
所述高效液相色谱条件的设置：流动相：体积比为80:20的甲醇和浓度为0.02mol/L乙酸铵溶液的混合液，流量为0.3mL/min；色谱柱：C18，150mm×2.1mm，3.5μm（美国Waters公司）；检测器：紫外检测器；进样体积：30μl；色谱柱温度：30℃；对样品浓缩液和对照品溶液进行测定。结果表明，样品浓缩液中大麻二酚的纯度99.8%，四氢大麻酚(THC)和大麻色烯(CBC)均未检出。
实施例2
一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，具体步骤如下：
（1）先称取工业大麻样品，用研磨机研磨成粉末后过100目筛，得到样品粉末，备用；
（2）将步骤（1）所述样品粉末置于提取容器中，接着向提取容器中加入甲醇和正己烷的混合溶液，所述混合溶液中甲醇和正己烷的体积比为60:40，所述样品粉末与混合溶液的质量体积比为2g：30ml，振荡提取2h后，离心收集上清液，向样品残渣中加入甲醇和正己烷的混合溶液，重复上述提取步骤，将两次提取后所得上清液合并，得到样品提取液；
（3）将步骤（2）所述样品提取液经0.22μm的聚四氟乙烯滤膜过滤后，将液体部分通入装填有丙烯酸吸附树脂的层析柱中，进行富集，所述样品提取液通入层析柱的速度为2ml/min，接着利用质量浓度3%的甲醇水溶液作为洗脱剂对富集后层析柱进行等度洗脱，流速控制在2.0BV/h，分段收集，将富含大麻二酚的部分合并，得到洗脱液，将洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原体积的1:10，得到样品浓缩液；所述丙烯酸吸附树脂的制备方法为：将大孔丙烯酸型树脂D152装入烧杯中，依次用去离子水、1mol/LHCl、去离子水、1mol/LNaOH洗涤，用去离子水洗至流出液为中性，抽滤去除去离子水，接着用过量饱和的三氯化钴溶液流经预处理后的树脂，而后用蒸馏水洗至流出液无钴离子，然后置于烘箱中65摄氏度下真空干燥，制得丙烯酸吸附树脂，所述丙烯酸吸附树脂的粒径在0.65?0.85mm范围内；
（4）取大麻二酚的标准对照品配制不同浓度梯度的对照品溶液，采用高效液相色谱仪对样品浓缩液以及对照品溶液进行检测，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量；
所述高效液相色谱条件的设置：流动相：体积比为80:20的甲醇和浓度为0.02mol/L乙酸铵溶液的混合液，流量为0.3mL/min；色谱柱：C18，150mm×2.1mm，3.5μm（美国Waters公司）；检测器：紫外检测器；进样体积：30μl；色谱柱温度：45℃；对样品浓缩液和对照品溶液进行测定。结果表明，样品浓缩液中大麻二酚的纯度99.7%，四氢大麻酚(THC)和大麻色烯(CBC)均未检出。
实施例3
一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，具体步骤如下：
（1）先称取工业大麻样品，用研磨机研磨成粉末后过80目筛，得到样品粉末，备用；
（2）将步骤（1）所述样品粉末置于提取容器中，接着向提取容器中加入甲醇和正己烷的混合溶液，所述混合溶液中甲醇和正己烷的体积比为80:20，所述样品粉末与混合溶液的质量体积比为5g：50ml，振荡提取3h后，离心收集上清液，向样品残渣中加入甲醇和正己烷的混合溶液，重复上述提取步骤，将两次提取后所得上清液合并，得到样品提取液；
（3）将步骤（2）所述样品提取液经0.22μm的聚四氟乙烯滤膜过滤后，将液体部分通入装填有丙烯酸吸附树脂的层析柱中，进行富集，所述样品提取液通入层析柱的速度为3ml/min，接着利用质量浓度3%的甲醇水溶液作为洗脱剂对富集后层析柱进行等度洗脱，流速控制在2.0BV/h，分段收集，将富含大麻二酚的部分合并，得到洗脱液，将洗脱液进行减压浓缩，浓缩至原体积的1:15，得到样品浓缩液；所述丙烯酸吸附树脂的制备方法为：将大孔丙烯酸型树脂D152装入烧杯中，依次用去离子水、1mol/L HCl、去离子水、1mol/L NaOH洗涤，用去离子水洗至流出液为中性，抽滤去除去离子水，接着用过量饱和的三氯化钴溶液流经预处理后的树脂，而后用蒸馏水洗至流出液无钴离子，然后置于烘箱中65摄氏度下真空干燥，制得丙烯酸吸附树脂，所述丙烯酸吸附树脂的粒径在0.65?0.85mm范围内；
（4）取大麻二酚的标准对照品配制不同浓度梯度的对照品溶液，采用高效液相色谱仪对样品浓缩液以及对照品溶液进行检测，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量；
所述高效液相色谱条件的设置：流动相：体积比为80:20的甲醇和浓度为0.02mol/L乙酸铵溶液的混合液，流量为0.3mL/min；色谱柱：C18，150mm×2.1mm，3.5μm（美国Waters公司）；检测器：紫外检测器；进样体积：30μl；色谱柱温度：45℃；对样品浓缩液和对照品溶液进行测定。结果表明，样品浓缩液中大麻二酚的纯度99.6%，四氢大麻酚(THC)和大麻色烯(CBC)均未检出。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
文章摘自国家发明专利，一种利用高效液相色谱技术检测工业大麻中大麻二酚的方法，发明人：滕亚君，龙云凤，刘汗青，谭智毅，陈康，李晓蕾，张薇，曾侣斌，董顺芳，张强，武梦琦，永婷婷，李瑶瑶，王浩，祁正有，李恒，纪仁春，张丽玲，申请号：202510976108.2，申请日：2025.07.16
