摘 要: 本发明涉及工业大麻耐涝性综合评价的方法技术领域,特别是基于熵值法的工业大麻耐涝性综合评价的方法及其应用,包括以下步骤:首先,准备工业大麻材料并进行栽培;在涝害胁迫处理的第9天,测定工业大麻的形态指标和生理指标,根据测定结果计算各指标的耐涝系数,并进行相关性分析以筛选核心指标;对筛选出的核心指标进行数据标准化处理,并运用熵值法分析计算各指标权重;最后,根据计算得到的指标权重,计算综合得分并进行耐涝性评价,双套盆法为涝害胁迫处理提供了标准化的方法,确保了实验的可重复性。耐涝系数的引入使得不同指标间具有可比性,为后续分析奠定了基础,相关性分析筛选核心指标的步骤有效降低了数据维度,避免了信息冗余。
权利要求书
1.基于熵值法的工业大麻耐涝性综合评价的方法,其特征在于,包括以下步骤:
首先,准备工业大麻材料并进行栽培,待植株生长至快速生长期约70cm高时,采用双套盆法进行涝害胁迫处理,其中将种植工业大麻的有孔花盆放入底部无孔的花盆中,每天定时补水使土壤含水量过饱和,并保持水面高出基质土表面3cm;
然后,在涝害胁迫处理的第9天,测定工业大麻的形态指标和生理指标,其中形态指标包括株高、茎粗、地上部干重和地下部干重,生理指标包括叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素总含量、类胡萝卜素含量、超氧化物歧化酶SOD活性、过氧化物酶POD活性、丙二醛MDA含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、相对电导率和根系活力;
接着,根据测定结果计算各指标的耐涝系数,并进行相关性分析以筛选核心指标;
随后,对筛选出的核心指标进行数据标准化处理,并运用熵值法分析计算各指标权重;
最后,根据计算得到的指标权重,计算综合得分并进行耐涝性评价。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述耐涝系数β的计算公式为:
β=涝害胁迫处理组测定值/对照组测定值
其中,对照组为正常水分处理组,β值越接近1,表示该指标受涝害影响越小,耐涝性越强。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述相关性分析采用相关系数热图方法,通过计算各指标间的相关系数,选择与形态指标相关性最大的生理指标作为核心指标,具体包括:
计算株高与其他指标的相关系数,选择相关系数绝对值最大的生理指标;
计算茎粗与其他指标的相关系数,选择相关系数绝对值最大的生理指标;
计算地上部干重与其他指标的相关系数,选择相关系数绝对值最大的生理指标;
计算地下部干重与其他指标的相关系数,选择相关系数绝对值最大的生理指标。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述数据标准化处理采用以下公式:
正向指标:
逆向指标:
其中,X为指标原始值,Xmin为指标最小值,Xmax为指标最大值;正向指标指数值越大越好的指标,逆向指标指数值越小越好的指标。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述熵值法分析包括以下步骤:
首先,计算第j项指标下第i个样本值占该指标总和的比重Pij:
其中,Xij为第j项指标下第i个样本的标准化值;
然后,计算各指标的信息熵ej:
其中,
n为样本数;
接着,计算各指标的信息效用值dj:
dj=1ej
最后,计算各指标的权重系数Wj:
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述综合得分的计算方法为:
将各指标的耐涝系数与对应的权重系数相乘,然后进行累加,得到最终的综合得分,综合得分越高,表示该工业大麻材料的耐涝性越强。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述形态指标的测定方法包括:
使用卷尺测量以大麻茎秆底部为起点,尖端为终点的株高;
使用游标卡尺测量距土面3cm处的主茎直径作为茎粗;
将植株地上部分在60℃下烘烤72h后称重得到地上部干重;
将植株根系洗净后在60℃下烘烤72h后称重得到地下部干重。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述生理指标的测定方法包括:
采用乙醇提取法测定叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总含量和类胡萝卜素含量;采用氮蓝四唑NBT光还原法测定SOD活性;采用愈创木酚显色法测定POD活性;采用硫代巴比妥酸TBA显色法测定MDA含量;采用酸性茚三酮法测定脯氨酸含量;采用考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白含量;采用蒽酮比色法测定可溶性糖含量;采用浸泡法测定相对电导率;采用TTC法测定根系活力。
9.根据权利要求18中任一项所述的方法,其特征在于,所述工业大麻材料包括不同品种的工业大麻,通过对不同品种进行耐涝性评价,可以筛选出耐涝性较强的工业大麻品种。
10.权利要求19中任一项所述方法在工业大麻育种中的应用,其特征在于,通过对不同工业大麻品种或育种材料进行耐涝性评价,筛选出耐涝性强的品种或个体,用于进一步的育种工作。
技术领域
本发明涉及工业大麻耐涝性综合评价的方法技术领域,特别是基于熵值法的工业大麻耐涝性综合评价的方法及其应用。
背景技术
涝害是影响全球农业生产力的主要环境因素之一,对作物生产安全造成严重危害。涝害对植物损伤的实质在于水分过多而阻碍了植物与大气间的气体交换,使周围氧气浓度过低形成低氧或无氧状态,导致植物受涝组织缺氧,而二氧化碳和乙烯等积累增加,致使植物生长受阻,作物产量降低。
大麻又被称为汉麻、火麻,隶属于大麻科大麻属,是雌雄异株的一年生草本植物。工业大麻是不具备直接毒品利用价值的大麻品种类型,其植株中的致幻成分四氢大麻酚(THC)的质量分数低于0.3%。目前,工业大麻在加拿大、美国以及欧洲、非洲、亚洲国家广泛种植,是多用途、可持续、低环境影响的作物,被广泛应用于多个领域,如纺织、服装、食品、饲料、化妆品、建筑、纸张、制药行业等。大麻主要适种于温带季风气候区和亚热带季风气候区中的沙质土和壤土环境,虽然需要充足水分才能高产,但工业大麻耐旱不耐涝。
近年来,随着全球气候变暖、冰川融化和极端天气的频发,以及雨季降水集中,多大雨、暴雨和连续性强降雨的发生,严重影响工业大麻的生长发育。而大多数工业大麻品种不耐涝,在生长发育的过程中容易受到涝害,导致产量下降、品质降低等问题。涝害对工业大麻的影响主要表现在生长发育、生理代谢和抗逆能力等方面上,许多学者对工业大麻抗逆方面的研究主要集中在抗旱、盐胁迫、温度胁迫等方面,而对工业大麻耐涝性研究报道较少,特别是涉及工业大麻耐涝性综合评价的方法。目前,大多数评价方法主要采用主成分分析与隶属函数法联用,过程较为复杂、繁冗。而本发明通过计算耐涝系数,并使用相关系数确定核心指标,减少评价指标的数量,再运用熵值法(Entropy weight method)建立科学、可靠的工业大麻耐涝性综合评价的方法,以此筛选工业大麻耐涝性种质资源。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明提供了基于耐涝系数、相关系数和熵值法的工业大麻耐涝性综合评价的方法及其应用,解决了上述背景技术中提出的大多数评价方法复杂且单一的问题。本发明通过结合形态指标和生理指标并计算耐涝系数和相关系数,然后筛选核心指标,减少评价指标的数量,再运用熵值法分析计算各指标的权重和各品种的综合得分,实现对各品种工业大麻耐涝能力的综合评价。本发明采用的熵值法是常用于多指标决策分析的方法,其计算原理基于信息熵理论。该方法可以将不同指标的重要性进行量化,并将其运用于评价和排名等领域,可提高工业大麻材料耐涝性鉴别的效率和准确率,为鉴定工业大麻耐涝能力强弱提供一个客观、可靠的方法。
本发明提出了基于熵值法的工业大麻耐涝性综合评价的方法,1.基于熵值法的工业大麻耐涝性综合评价的方法,其特征在于,包括以下步骤:
首先,准备工业大麻材料并进行栽培,待植株生长至快速生长期约70cm高时,采用双套盆法进行涝害胁迫处理,其中将种植工业大麻的有孔花盆放入底部无孔的花盆中,每天定时补水使土壤含水量过饱和,并保持水面高出基质土表面3cm;
然后,在涝害胁迫处理的第9天,测定工业大麻的形态指标和生理指标,其中形态指标包括株高、茎粗、地上部干重和地下部干重,生理指标包括叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素总含量、类胡萝卜素含量、超氧化物歧化酶SOD活性、过氧化物酶POD活性、丙二醛MDA含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、相对电导率和根系活力;
接着,根据测定结果计算各指标的耐涝系数,并进行相关性分析以筛选核心指标;
随后,对筛选出的核心指标进行数据标准化处理,并运用熵值法分析计算各指标权重;
最后,根据计算得到的指标权重,计算综合得分并进行耐涝性评价。
优选地,所述耐涝系数β的计算公式为:
β=涝害胁迫处理组测定值/对照组测定值
其中,对照组为正常水分处理组,β值越接近1,表示该指标受涝害影响越小,耐涝性越强。
优选地,所述相关性分析采用相关系数热图方法,通过计算各指标间的相关系数,选择与形态指标相关性最大的生理指标作为核心指标,具体包括:
计算株高与其他指标的相关系数,选择相关系数绝对值最大的生理指标;
计算茎粗与其他指标的相关系数,选择相关系数绝对值最大的生理指标;
计算地上部干重与其他指标的相关系数,选择相关系数绝对值最大的生理指标;
计算地下部干重与其他指标的相关系数,选择相关系数绝对值最大的生理指标。
优选地,所述数据标准化处理采用以下公式:
正向指标:
逆向指标:
其中,X为指标原始值,Xmin为指标最小值,Xmax为指标最大值;正向指标指数值越大越好的指标,逆向指标指数值越小越好的指标。
优选地,所述熵值法分析包括以下步骤:
首先,计算第j项指标下第i个样本值占该指标总和的比重Pij:
其中,Xij为第j项指标下第i个样本的标准化值;
然后,计算各指标的信息熵ej:
其中,
n为样本数;
接着,计算各指标的信息效用值dj:
dj=1ej
最后,计算各指标的权重系数Wj:
优选地,所述综合得分的计算方法为:
将各指标的耐涝系数与对应的权重系数相乘,然后进行累加,得到最终的综合得分,综合得分越高,表示该工业大麻材料的耐涝性越强。
优选地,所述形态指标的测定方法包括:
使用卷尺测量以大麻茎秆底部为起点,尖端为终点的株高;
使用游标卡尺测量距土面3cm处的主茎直径作为茎粗;
将植株地上部分在60℃下烘烤72h后称重得到地上部干重;
将植株根系洗净后在60℃下烘烤72h后称重得到地下部干重。
优选地,所述生理指标的测定方法包括:
采用乙醇提取法测定叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总含量和类胡萝卜素含量;采用氮蓝四唑NBT光还原法测定SOD活性;采用愈创木酚显色法测定POD活性;采用硫代巴比妥酸TBA显色法测定MDA含量;采用酸性茚三酮法测定脯氨酸含量;采用考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白含量;采用蒽酮比色法测定可溶性糖含量;采用浸泡法测定相对电导率;采用TTC法测定根系活力。
优选地,所述工业大麻材料包括不同品种的工业大麻,通过对不同品种进行耐涝性评价,可以筛选出耐涝性较强的工业大麻品种。
所述方法在工业大麻育种中的应用,通过对不同工业大麻品种或育种材料进行耐涝性评价,筛选出耐涝性强的品种或个体,用于进一步的育种工作。
本发明的有益效果主要体现在以下几个方面:
本发明的方法巧妙地结合了多个创新点,形成了一个系统、高效的评价体系。双套盆法为涝害胁迫处理提供了标准化的方法,确保了实验的可重复性。耐涝系数的引入使得不同指标间具有可比性,为后续分析奠定了基础。相关性分析筛选核心指标的步骤有效降低了数据维度,避免了信息冗余。熵值法的应用则解决了指标权重确定的客观性问题。这些步骤之间存在着紧密的逻辑关系和协同作用,共同构成了一个完整、可靠的评价体系。
与其他作物的评价方法不同,本发明是基于耐涝系数和相关系数,采用熵值法对工业大麻种质资源耐涝性进行综合评价:首先对工业大麻的生长生理等多项指标用耐涝系数进行转化,再通过相关系数筛选核心指标,运用熵值法分析计算各指标的权重,将各指标数据与对应的权重相乘后进行累加,即为各材料的“综合得分”,根据综合得分的高低得到各材料的耐涝性排名;本发明的评价结果与外部形态特征观察基本一致,对于耐涝工业大麻种质的筛选具有指导意义。
此外,现有的耐涝性评价方法大多采用单一指标评价或主成分分析与隶属函数法联用,存在测定指标过多、流程复杂、直观性不够等缺点;而本发明提供耐涝性评价的方法,是通过测定各类指标计算出耐涝系数和相关系数,筛选出核心指标,根据核心指标运用熵值法计算权重和综合得分,然后做出是否具有较高耐涝性的评价,与现有技术相比,方法更加简单、直观,具有一定的先进性。
附图说明
图1为本发明的涝害胁迫下不同工业大麻品种各指标间的相关分析热图,图中右上区域的数字为各指标间相关系数,字体颜色越深,相关性越强,字体颜色越浅,相关性越弱;左下区域的方块颜色越深,相关性越强,颜色越浅,相关性越弱。红色表示正相关,蓝色表示负相关。*表示显著相关(p<0.05),**表示极显著相关(p<0.01)。
图1
图2为本发明实施例对工业大麻进行耐涝性评价的流程示意图;
图2
图3为本发明实施例中不同工业大麻品种涝害胁迫第9d时的整体形态示意图。
图3
注:CK为正常水分处理;WS为涝害胁迫处理。
具体实施方式
为了更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效,以下结合附图及较佳实施例,其具体实施方式、结构、特征及其功效,详细说明如下。在下述说明中,不同的“一个实施例”或“另一个实施例”指的不一定是同一实施例。此外,一或多个实施例中的特定特征、结构或特点可由任何合适形式组合。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。
参阅图13,本实施例以5个工业大麻品种作为研究对象,采用“双套盆法”进行涝害胁迫处理,结合形态指标与生理指标,分析其株高、茎粗、地上部干重和地下部干重4个形态指标及其叶绿素a含量、叶绿素b含量、叶绿素总含量、类胡萝卜素含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、丙二醛(MDA)含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、相对电导率和根系活力(TTC还原强度)12个生理指标的变化,计算耐涝系数和进行相关系数分析,选择形态指标以及与各形态指标相关性最大的生理指标,应用熵值法进行权重计算和排名,对工业大麻耐涝性进行综合评价。
本发明提供了基于熵值法的工业大麻耐涝性综合评价的方法及其应用
该方法包括以下步骤:
1.准备工业大麻材料并进行栽培:
在本发明的一个实施例中,选用4个云南主要推广的工业大麻品种‘云麻1号’?‘云麻7号’?‘云麻8号’?‘云麻10号’和1个广西主要推广的工业大麻品种‘巴马火麻’为供试材料。在云南大学资源植物研究院/农学院对以上收集到的5个工业大麻品种进行涝害胁迫试验。这些品种代表了目前主要推广的工业大麻品种,具有较好的代表性。
2“.双套盆法”模拟涝害胁迫:
将5种材料的种子分别播种于塑料花盆中,花盆规格为底部有孔,外口径、内口径、底径、高分别为32、27、17和20cm。种植基质为泥炭营养土:园土:珍珠岩=5:4:1(v:v:v)的混合基质,质量约为泥炭营养土0.8kg、园土3.75kg、珍珠岩0.1kg,且每盆拌10g复合肥(N+P2O5+K2O≥38.0%)作为基肥,这种配比可以为工业大麻幼苗提供良好的生长环境。每个品种种6盆,每盆播种18粒种子,出苗后待幼苗长至3对真叶时进行间苗,每盆定苗6株。这样可以确保每株植物有足够的生长空间,避免因植株过密而影响实验结果。期间,正常管理,每天上午9点浇水,每盆浇500ml(阴雨天气视情况而定),保证基质土壤表面潮湿但不积水。在间苗后视大麻情况使用复合肥或尿素进行追肥。在工业大麻快速生长期(约70cm高)时,对5个工业大麻品种进行涝害胁迫处理。
各供试材料被分为正常水分处理组(CK)和涝害胁迫处理组(Waterlogging stress,WS),CK正常浇水,每天上午9点浇水,每盆浇500ml,WS采用“双套盆法”,将种植工业大麻的有孔花盆放入底部无孔的花盆(外口径、内口径、底径、高分别为34、29、18和22cm)中进行涝害胁迫处理,每天上午9点和下午6点补水,使土壤含水量过饱和,保持水面高出基质土表面3cm。这种处理方法可以确保植物根系始终处于过湿环境中,从而诱导涝害反应。
3.涝害胁迫后取样时间点的确定:
在涝害胁迫处理的第9天,对工业大麻的形态指标和生理指标进行测定。选择第9天进行测定是因为此时大部分植株已经显现出不同程度的涝害症状,如叶片萎蔫或枯黄,但尚未致死。这个时间点可以很好地反映出不同品种对涝害的耐受能力差异。
4.指标测定:
测定各工业大麻品种的形态指标和生理指标,在进行指标测定前,随机选取不同品种不同处理条件下的植株各1盆进行拍照,并选取不同品种不同处理条件下的3株供试植株用于各项形态指标和生理指标的测定,其中,生理指标在每组中随机选择3株大麻的第2~5对展开叶(避开叶脉)或根进行测量,结果取平均值。
形态指标包括株高、茎粗、地上部干重、地下部干重。其中,株高用卷尺测量以大麻茎秆底部为起点,尖端为终点的株高;茎粗用游标卡尺(精度0.01cm)测量距土面3cm处的主茎直径;地上部干重将植株地上部分放入烘箱中,温度60℃烘烤72h,取出称重;地下部干重将植株挖出根系,用清水轻轻洗去土壤,滤纸吸干表面水分,放入烘箱中,温度60℃烘烤72h,取出称重。这些形态指标可以直观地反映出植物在涝害条件下的生长状况。
生理指标包括叶绿素含量a含量、叶绿素b含量、叶绿素总含量、类胡萝卜素含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、丙二醛(MDA)含量、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、相对电导率、根系活力(TTC还原强度)。其中,叶绿素a、叶绿素b、叶绿素总含量、类胡萝卜素含量采用乙醇提取法测定,SOD活性采用氮蓝四唑(NBT)光还原法测定,POD活性釆用愈创木酚显色法测定,MDA含量采用硫代巴比妥酸(TBA)显色法测定,脯氨酸含量采用酸性茚三酮法测定,可溶性蛋白含量采用考马斯亮蓝法测定,可溶性糖含量采用蒽酮比色法测定,相对电导率采用浸泡法测定,根系活力采用TTC法测定。这些生理指标可以从不同角度反映植物在涝害胁迫下的生理响应,为全面评价耐涝性提供了丰富的数据基础。
5.耐涝系数的计算:
对所选的16个形态指标及生理指标使用Microsoft Excel 2021进行数据处理与统计分析,并根据正常水分处理组(CK)和涝害胁迫处理组(Waterlogging stress,WS)的测定值进行耐涝系数(β)的计算。
耐涝系数(β)的计算:
耐涝系数(β)=涝害胁迫处理组测定值/对照组测定值。
其中,对照组为正常水分处理组。β值越接近1,表示该指标受涝害影响越小,耐涝性越强。这种处理方法可以将不同指标的数据标准化,便于后续的比较和分析。
表1 各指标的耐涝系数(β)
6.相关系数分析:
利用Origin 2021绘制相关系数热图。对涝害胁迫下5个工业大麻品种的16个指标进行相关分析,筛选与形态指标相关系数较高的生理指标,结果表明,株高与地下部干重极显著相关(p<0.01,下同),相关系数为0.99,与类胡萝卜素含量显著相关(p<0.05,下同),相关系数为0.96;茎粗与各生理指标的相关性均未达显著水平,但茎粗与脯氨酸含量的相关系数最高,为0.77;地上部干重与地下部干重显著相关,相关系数为0.91,与叶绿素b含量极显著相关,相关系数为0.97;地下部干重与叶绿素b和类胡萝卜素含量显著相关,相关系数分别为0.88和0.93(图1)。这种方法可以有效降低指标数量,避免信息冗余,提高评价的效率和准确性。
综上所述,除4个形态指标外,共选取了3个与形态指标相关系数较高的生理指标,分别是类胡萝卜素含量、脯氨酸含量和叶绿素b含量进行耐涝性综合评价。
7.耐涝性综合评价:熵值法分析
以各工业大麻品种的形态指标以及相关系数分析筛选出的生理指标的耐涝系数为基础,运用Excel2021和SPSSAP在线SPSS分析软件完成权重计算,对涝害胁迫下5个工业大麻品种的4项形态指标及3项生理指标的耐涝系数进行熵值法分析。
7.1方向及量纲处理:
正向指标:
逆向指标
其中,正向指标是指数据越大越好的指标,逆向指标是指数据越小越好的指标;Xmin表示指标最小值,Xmax表示指标最大值。这种处理可以消除不同指标间的量纲差异,使数据具有可比性。
7.2熵值法计算公式:
(1)信息熵值e:
①计算第j项指标下第i个样本值占比重:
②计算各指标的信息熵:
其中,
(2)信息效用值djdj=1ej
(3)权重系数值Wj:
熵值法的优势在于可以客观地确定各指标的权重,避免主观因素的影响。
由表2可以看出,使用熵值法对株高、茎粗、地上部干重、地下部干重、叶绿素b含量、类胡萝卜素含量和脯氨酸含量进行权重计算,其权重值分别是0.198、0.080、0.167、0.198、0.091、0.160、0.106。并且各指标间的权重相对较为均匀,均在0.143附近。这些权重反映了各指标在评价工业大麻耐涝性中的相对重要性。
表2 熵值法计算权重结果汇总
8、计算综合得分:
综合得分是熵值法用于最终综合评价的决定性指标,得到各指标权重后,将各指标数据与对应的权重相乘后进行累加,即为“综合得分”。综合得分越高,品种耐涝性越好。
结果表明,5个工业大麻品种的耐涝性排名为‘云麻7号’>‘云麻8号’>‘云麻10号’>‘云麻1号’>‘巴马火麻’,5个品种中,‘云麻7号’的综合得分最高,为0.812,所以耐涝性最强,‘巴马火麻’的综合得分最低,为0.222,耐涝性最弱(表3)。
表3 熵值法计算工业大麻品种的综合得分及耐涝性排名
本发明方法的一个重要应用是在工业大麻育种中筛选耐涝性强的品种或个体。通过对不同工业大麻品种或育种材料进行耐涝性评价,育种工作者可以快速、准确地识别出具有较强耐涝性的材料,用于进一步的育种工作。这对于提高工业大麻的抗逆性,特别是在气候变化背景下提高其适应能力具有重要意义。
总的来说,本发明提供的基于熵值法的工业大麻耐涝性综合评价方法具有以下优点:首先,它综合考虑了形态和生理指标,全面反映了植物的耐涝特性;其次,通过引入耐涝系数和相关性分析,有效简化了评价过程;再次,采用熵值法确定指标权重,避免了主观因素的影响;最后,该方法操作简单,评价结果直观,易于在实际育种工作中应用。这些特点使得本方法在工业大麻耐涝性评价和育种领域具有广阔的应用前景。
需要说明的是:以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
文章摘自:国家发明专利,基于熵值法的工业大麻耐涝性综合评价的方法及其应用,发明人:杜光辉,王珊珊,陈继康,汤开磊,欧阳文静,申请号:202411551688.2,申请日:2024.11.01。
