摘 要：<正>罗布麻（Apocynum venetum L.）为夹竹桃科罗布麻属植物，其干燥叶是维吾尔族习用药材，兼具药用与茶饮价值，现代药理证实其具有降压、抗氧化、抗炎等多种活性[1-2]。此前，对其抗炎活性的研究大多聚焦于多糖、三萜类成分[3-4]，而罗布麻叶醇提物（the extract of Apocynum venetum leaves,AVLE）主要活性成分为黄酮、酚酸类，与上述成分存在本质差异[5]。目前，针对AVLE抗炎分子机制的研究少见报道。因此，本研究以脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导RAW264.7巨噬细胞的体外炎症模型，探究AVLE的抗炎活性及分子机制，为罗布麻叶在抗炎领域的研究与开发提供科学依据。
关键词：罗布麻叶；RAW264.7细胞；MAPK信号通路；Nrf2信号通路；抗炎；作用机制
罗布麻（Apocynum venetum L.）为夹竹桃科罗布麻属植物，其干燥叶是维吾尔族习用药材，兼具药用与茶饮价值，现代药理证实其具有降压、抗氧化、抗炎等多种活性[1-2]。此前，对其抗炎活性的研究大多聚焦于多糖、三萜类成分[3-4]，而罗布麻叶醇提物（the extract of Apocynum venetum leaves，AVLE）主要活性成分为黄酮、酚酸类，与上述成分存在本质差异[5]。目前，针对AVLE抗炎分子机制的研究少见报道。因此，本研究以脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导RAW264.7巨噬细胞的体外炎症模型，探究AVLE的抗炎活性及分子机制，为罗布麻叶在抗炎领域的研究与开发提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 细胞株 RAW264.7小鼠单核巨噬细胞系，由新疆医科大学惠赠。
1.2 药品与试剂、仪器 罗布麻叶，阿勒泰戈宝茶股份有限公司；穿心莲内酯（andrographolide，AG）购自MCE公司；COX-2抗体（12282S），p-JNK抗体（4668S），JNK抗体（9252S），p-ERK1/2抗体（9106S），ERK1/2抗体（4696S），p-p38MAPK抗体（4511S），p38MAPK抗体（9212S），Nrf2抗体（12721S）均购自CST公司；HO-1抗体（Abcam，ab68477）；iNOS抗体（Affinity Biosciences，AF0199）；多功能酶标仪（Mo-lecular Devices，SpectraMax M5）。
1.3 方法
1.3.1 AVLE的制备 罗布麻叶经50%乙醇回流提取2次，每次1h，经HPD300树脂纯化，50%乙醇洗脱后浓缩干燥，制得备用。
1.3.2 细胞活力检测 实验分为Control组、AG组（5µmol·L-1）和AVLE组（31.25、62.5、100、125、200、250µg·mL-1），CCK-8法检测细胞存活率，确定无毒给药浓度。
1.3.3 AVLE对LPS诱导RAW264.7细胞中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β分泌的影响 实验分为Control组、LPS组、AG组（5µmol·L-1）、AVLE组（31.25、62.5、100、125、200µg·mL-1）。细胞孵育24h后，AVLE预处理1h，除Control组外各组均加入1µg·mL-1 LPS培养16h；Griess法检测NO含量，ELISA试剂盒检测TNF-α、IL-6、IL-1β含量。
1.3.4 AVLE对LPS诱导RAW264.7细胞中ROS含量的影响 细胞内ROS检测采用DCFH-DA方法。
1.3.5 AVLE对炎症相关蛋白表达的影响 Western blot法检测iNOS、COX-2、MAPK信号通路及Nrf2信号通路相关蛋白表达。
1.3.6 免疫荧光法检测Nrf2核转位情况 免疫荧光法观察Nrf2核转位，ImageJ 1.48软件半定量分析。
表1
##P<0.01 vs control；*P<0.05，**P<0.01 vs LPS.
1.3.7 统计学方法 SPSS 17.0软件进行统计分析。数据以（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析（ANOVA），检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 AVLE对RAW264.7细胞活力的影响 与Control组比较，AVLE≤200µg·mL-1时对细胞活力无明显影响（P>0.05），后续实验选取200µg·mL-1及以下无毒浓度。
2.2 AVLE对LPS诱导RAW264.7细胞中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β和ROS含量的影响 与Control组比较，LPS组细胞中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β和ROS的含量明显升高（P<0.01）；与LPS组比较，AVLE可明显降低细胞中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β和ROS的含量（P<0.01或P<0.05）。
2.3 AVLE抑制iNOS和COX-2蛋白表达水平 与Control组比较，LPS组iNOS、COX-2蛋白表达明显上调（P<0.01）；与LPS组比较，AVLE各剂量组iNOS、COX-2蛋白表达均明显下调（P<0.01）。
2.4 AVLE对MAPK信号通路的影响 与Control组相比，LPS组的p-ERK/ERK、p-p38/p38比值明显上调（P<0.01）；与LPS组比较，AVLE各剂量组p-ERK/ERK、p-p38/p38的比值均明显下调（P<0.01或P<0.05）。
2.5 AVLE对Nrf2信号通路的影响 与Control组比较，LPS组Nrf2、HO-1蛋白表达明显上调（P<0.01）；与LPS组比较，AVLE各剂量组Nrf2、HO-1蛋白表达均明显上调（P<0.01）。
2.6 AVLE对Nrf2表达及核转位的影响 与LPS组相比，AVLE各剂量组对Nrf2核转位具有明显的促进作用（P<0.01），提示AVLE可诱导细胞中Nrf2发生核转位，进而增强细胞的抗氧化抗炎能力。
3 讨论
MAPK由ERK、p38和JNK三种蛋白激酶分子构成，在炎症研究领域扮演着极其重要的角色[6]。本研究结果表明，AVLE可通过降低p-p38和p-ERK蛋白的表达来抑制炎症反应，然而对p-JNK蛋白表达的影响不显著。这种通路选择性可能与AVLE所含多成分协同作用密切相关，且不同活性成分对MAPK通路各亚型的调控效应本身存在明显差异[7-8]。Nrf2是氧化应激核心转录因子，能启动抗氧化基因表达，清除ROS并阻断炎症级联反应。本研究中，AVLE能够降低细胞内ROS含量，激活Nrf2通路并促进Nrf2核转位，实现抗氧化与抗炎协同作用。综上，AVLE在体外细胞水平具有明显抗炎活性，其机制与抑制炎症介质释放、调控MAPK及Nrf2信号通路密切相关。后续应进一步开展体内炎症模型实验研究，深入验证其抗炎作用，为其临床应用提供更充分的实验依据。
参考文献：
[1]Chen C，Chen F，Gu L，et al.Discovery and validation of COX2 as a target of flavonoids in Apocyni Veneti Folium：implications for the treatment of liver injury[J].J Ethnopharmacol，2024，326：117919.
[2]李芝，王超云，张树平，等.罗布麻叶总黄酮对高脂高盐大鼠高血压的影响及其分子机制[J].中草药，2012，43（3）：540-5.
[2]Li Z，Wang C Y，Zhang S P，et al.Effect of total flavonoids in Apocynum venetum leaves on rat hypertension induced by high fat and high salt and its molecular mechanism[J].Chin Tradit Herb Drugs，2012，43（3）：540-5.
[3]Du S Y，Huang H F，Li X Q，et al. Anti-inflammatory proper-ties of uvaol on DSS-induced colitis and LPS-stimulated macro-phages[J].Chin Med，2020，15：43.
[4]Abubakar A S，Ahmad B，Ahmad N，et al.Physicochemical evaluation，structural characterization，in vitro and in vivo bioac-tivities of water-soluble polysaccharides from Luobuma（Apocy-num L.）tea[J].Food Chem，2024，460：140453.
[5]Si L，Chen L，Abdulla R，et al.Anti-hyperlipidemic effects of Apocynum venetum L.leaves extract on high-fat diet-induced hy-perlipidemia：Modulation of lipid metabolism and oxidative stress[J].Food Res Int，2025，221：117326.
[6]乌里盼·托乎达阿里，孙媛，丁宛婷，等.基于miRNA155-5p介导的MAPK/NF-?B通路探讨尿石素A的抗炎机制[J].中国药理学通报，2024，40（6）：1066-74.
[6]TUOHUDAALI W L，Sun Y，Ding W T，et al.Exploring anti-inflammatory mechanism of urolithin A based on miRNA155-5p-mediated MAPK/NF-?B pathway[J].Chin Pharmacol Bull，2024，40（6）：1066-74.
[7]Hai J J，Liang W，Sun D，et al.Rutin attenuates distraction spi-nal cord injury by inhibiting microglial inflammation through downregulation of P38 MAPK/NF-?B/STAT3 pathway[J].Mol Neurobiol，2025，62（5）：6027-40.
[8]Li Y，Ma Y，Yao Y，et al.Protective effect of isoquercitrin on UVB-induced injury in HaCaT cells and mice skin through anti-inflammatory，antioxidant，and regulation of MAPK and JAK2-STAT3 pathways[J].Photochem Photobiol，2024，100（5）：1507-18.
文章摘自：司丽君,陈丽,康金森,等.罗布麻叶醇提物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的保护作用及机制[J/OL].中国药理学通报,2026,(5):999-1000[2026-07-02].https://link.cnki.net/urlid/34.1086.R.20260610.1100.006.
